Dithiothreitol (DTT) dia fanafody fampihenana mahazatra, fantatra ihany koa amin'ny hoe additive maitso vaovao.Izy io dia fitambarana organika molekiola kely misy vondrona mercaptan roa (-SH).Noho ny fampihenana ny fananana sy ny fahamarinan-toerana, DTT dia be mpampiasa amin'ny biochemistry sy ny molekiola biolojia andrana.
Ny anjara asan'ny DTT dia ny fampihenana ny fifamatorana disulfide amin'ny proteinina sy ny biomolekul hafa.Ny fatorana disulfide dia ampahany manan-danja amin'ny fatorana proteinina sy ny fahamarinan-toerana, saingy amin'ny toe-javatra andrana sasany, toy ny fanadihadiana SDS-PAGE azo ahena, ny famerenana indray ny proteinina ary ny fatorana, dia ilaina ny mampihena ny fifamatorana disulfide amin'ny vondrona thiol roa mba hamahana ny firafitry ny habakabaka. ny proteinina.Ny DTT dia afaka mihetsika amin'ny fatorana disulfide mba hampihenana azy ireo amin'ny vondrona mercaptan, ka manokatra ny firafitry ny proteinina ary manamora ny famakafakana sy ny fanodikodinana.
Ny DTT dia azo ampiasaina mba hiarovana ny asan'ny enzyme sy ny fahamarinan-toerana.Amin'ny fihetsiketsehan'ny enzyme sasany dia mety hihena ny asan'ny enzyme amin'ny alàlan'ny oxidant.Ny DTT dia afaka mihetsika miaraka amin'ny oxidants mba hampihenana azy ireo amin'ny zavatra tsy mampidi-doza, ka miaro ny hetsika sy ny fahamarinan'ny enzyme.
Raha oharina amin'ny fanafody fampihenana nentim-paharazana toy ny β-mercaptoethanol (β-ME), ny DTT dia heverina ho azo antoka kokoa sy azo antoka kokoa.Tsy miorina amin'ny vahaolana aqueous fotsiny izy io, fa mitazona ny toetrany mampihena ihany koa amin'ny hafanana ambony sy ny asidra-base.
Ny fampiasana DTT dia tsotra.Amin'ny ankapobeny, ny DTT dia levona ao anaty buffer sahaza ary avy eo ampidirina amin'ny rafitra andrana.Ny fifantohana tsara indrindra amin'ny DTT dia mila faritana araka ny fanandramana manokana, ary amin'ny ankapobeny dia ampiasaina amin'ny 0.1-1mM.Ny fifantohana ambany kokoa dia mety hampihena ny fiantraikany ratsy amin'ny fitomboan'ny sela ary mety hampihena ny cytotoxicity noho ny fanehoana tafahoatra ny proteinina kendrena.Ny fifantohana ambony kokoa dia mety hiteraka enta-mavesatra amin'ny metabolika amin'ny sela, misy fiantraikany amin'ny fitomboan'ny sela sy ny fahombiazan'ny fanehoana.
Ny fomba hamaritana ny fifantohana tsara indrindra dia ny fanombanana ny haavon'ny fitenenana ny proteinina kendrena amin'ny alàlan'ny fanaovana fitiliana induction IPTG amin'ny fifantohana samihafa.Ny fitsapana kolontsaina madinika dia azo atao amin'ny fampiasana karazana IPTG (ohatra 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM, sns.) fampahafantarana ny blot na ny fluorescence).Araka ny valin'ny fanandramana, ny fifantohana misy fiantraikany tsara indrindra dia nofantenana ho fifantohana tsara indrindra.
Ho fanampin'izay, azonao atao koa ny manondro ny literatiora mifandraika na ny traikefan'ny laboratoara hafa mba hahatakarana ny haavon'ny fifantohana IPTG mahazatra amin'ny toe-javatra andrana mitovy, ary avy eo manatsara sy manitsy araka ny filana andrana.
Zava-dehibe ny manamarika fa ny fifantohana tsara indrindra dia mety miovaova arakaraka ny rafitra fanehoan-kevitra samihafa, ny proteinina kendrena ary ny toe-javatra andrana, noho izany dia tsara indrindra ny manatsara amin'ny tranga tsirairay.
Raha fintinina, ny DTT dia fitaovana fampihenana matetika ampiasaina mba hampihenana ny fatorana disulfide amin'ny proteinina sy ny biomolekul hafa ary hiarovana ny asan'ny enzyme sy ny fahamarinan-toerana.Nampiasaina be izy io tamin'ny andrana biochemistry sy molecular biology.
Fotoana fandefasana: Sep-28-2023