Dithiothreitol (DTT) dia akora mampihena ampiasaina matetika, fantatra ihany koa amin'ny hoe akora maitso vaovao. Izy io dia singa organika molekiolary kely misy vondrona mercaptan roa (-SH). Noho ny toetrany mampihena sy ny fahamarinany, ny DTT dia ampiasaina betsaka amin'ny biokimia sy ny andrana biolojia molekiolary.
Ny anjara asa lehibe amin'ny DTT dia ny mampihena ny fifamatorana disulfida ao amin'ny proteinina sy ny biomolecules hafa. Ny fifamatorana disulfida dia ampahany manan-danja amin'ny fivalanana sy ny fahamarinan'ny proteinina, saingy amin'ny toe-javatra fanandramana sasany, toy ny famakafakana SDS-PAGE azo ahena, ny fampifangaroana proteinina ary ny fivalanana, dia ilaina ny mampihena ny fifamatorana disulfida ho vondrona thiol roa mba hamahana ny rafitra ara-habakabaka an'ny proteinina. Ny DTT dia afaka mihetsika amin'ny fifamatorana disulfida mba hampihenana azy ireo ho vondrona mercaptan, ka manokatra ny rafitra ara-habakabaka an'ny proteinina ary mahatonga azy io ho mora ny mamakafaka sy manodina.
Azo ampiasaina hiarovana ny fiasan'ny anzima sy ny fahamarinan-toerana ihany koa ny DTT. Amin'ny fihetsika sasany ampiasan'ny anzima, dia mety hampihena ny fiasan'ny anzima ny oksidana. Afaka mihetsika amin'ny oksidana ny DTT mba hampihenana azy ireo ho lasa akora tsy mampidi-doza, ka miaro ny fiasan'ny anzima sy ny fahamarinan-toerana.
Raha ampitahaina amin'ireo akora mampihena nentim-paharazana toy ny β-mercaptoethanol (β-ME), ny DTT dia heverina ho akora mampihena azo antoka kokoa sy marin-toerana kokoa. Tsy vitan'ny hoe marin-toerana ao anaty rano fotsiny izy io, fa mitazona ny toetrany mampihena ihany koa na dia eo aza ny mari-pana avo sy ny toe-javatra misy asidra-base.
Tsotra ihany ny fampiasana ny DTT. Amin'ny ankapobeny, levona ao anaty buffer sahaza azy ny DTT ary avy eo ampiana amin'ny rafitra fanandramana. Mila faritana araka ny fanandramana manokana ny fifantohana tsara indrindra amin'ny DTT, ary ampiasaina amin'ny ankapobeny eo anelanelan'ny 0.1-1mM. Ny fifantohana ambany kokoa dia afaka mampihena ny voka-dratsy amin'ny fitomboan'ny sela ary mety hampihena ny cytotoxicity vokatry ny fihoaram-pefy ataon'ny proteinina kendrena. Ny fifantohana ambony kokoa dia mety hiteraka enta-mavesatra tafahoatra amin'ny metabolisman'ny sela, izay misy fiantraikany amin'ny fitomboan'ny sela sy ny fahombiazan'ny fanehoana.
Ny fomba hamaritana ny fifantohana tsara indrindra dia ny fanombanana ny haavon'ny fanehoana ny proteinina kendrena amin'ny alàlan'ny fanaovana fitsapana famporisihana IPTG amin'ny fifantohana samihafa. Ny fitsapana kolontsaina kely dia azo atao amin'ny alàlan'ny fampiasana fifantohana IPTG isan-karazany (oh: 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, sns.) ary ny vokatry ny fanehoana amin'ny fifantohana samihafa dia azo tombanana amin'ny alàlan'ny famantarana ny haavon'ny fanehoana ny proteinina kendrena (oh: Western blot na fluorescence detection). Araka ny valin'ny fanandramana, ny fifantohana misy ny vokatry ny fanehoana tsara indrindra no nofidina ho fifantohana tsara indrindra.
Ankoatra izany, azonao atao ihany koa ny mijery ireo literatiora mifandraika amin'izany na ny traikefan'ny laboratoara hafa mba hahatakarana ny tahan'ny fifantohana IPTG ampiasaina matetika amin'ny toe-javatra mitovy amin'izany, ary avy eo dia manatsara sy manitsy araka ny filàna amin'ny fanandramana.
Zava-dehibe ny manamarika fa mety miovaova arakaraka ny rafitra fanehoana samihafa, ny proteinina kendrena ary ny fepetra andrana ny fifantohana tsara indrindra, noho izany dia tsara kokoa ny manatsara izany isaky ny tranga.
Raha fintinina, ny DTT dia akora mampihena ampiasaina matetika izay azo ampiasaina hampihenana ny fifamatorana disulfide ao amin'ny proteinina sy biomolecules hafa ary hiarovana ny asan'ny anzima sy ny fahamarinan-toerana. Nampiasaina betsaka tamin'ny biokimia sy ny andrana biolojia molekiola izy io.
Fotoana fandefasana: 28 Septambra 2023